培养容器应该以什么速度旋转?
这取决于细胞聚合体的直径。当容器转动时,细胞聚合体加速,直到他们到达沉积速度,而该速度取决于细胞聚合体的大小。根据斯托克斯方程,沉降速率随着细胞聚合体半径的平方而增加。因此,细胞培养技术,随着聚合体体积上的增加,它们沉降的更迅速,同时为了防止细胞聚合体与培养壁的碰撞有必要增加旋转速度。因此,一开始可能以慢速旋转培养,例如7rpm,当细胞聚合体在体积上增长并且变得可见,再增加旋转的速度。
污染途径 污染物,特别是微生物常通过下列途径进入培养体系,细胞培养,造成污染
1、空气:空气是微生物及尘埃颗粒传播的主要途径。空气流动性大,如果培养操作场地于外界隔离不严格或消毒不充分,外界不洁空气很容易进入造成污染。因此,培养设施不能设在通风场所。无菌操作应在净化台内进行,工作时要带口罩,以免因讲话、咳嗽等使外界污染进入操作面,造成污染。
2、器材:各种培养器皿、器械消毒不彻底和洗刷不干净导致污染,另外需要对培养箱进行定期消毒,防止形成污染
3、操作:实验操作无菌观念不强,生物细胞培养,技术不熟练,使用污染的器皿或封瓶不严等,都可以造成污染。培养两种细胞以上时,操作不规范,交叉使用吸管或培养液、瓶等有可能导致细胞交叉污染。
4、血清:有些血清在生产时就已经被支原体或病毒等污染,变成了污染。
5、组织样本:原代培养的污染多数来源于组织样本;取材时碘酒消毒后脱碘不彻底,可造成碘混入组织,细胞或培养液中,影响细胞细胞生长。
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