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应用TaqDNA聚合酶时,单核昔酸掺入的速率较高,75℃一80℃时,每个酶分子每秒钟可完成150个核昔合成.PCR每一周期需数分种,所以,一般取用20一30个周期能使目的DNA达到数百万倍扩增的反应只需数小时即可完成.在基因分离,突变体构建,DNA测序等方面,PCR方法均较之常规方法快速得多.例如,乾芸GENIN PCRroom-1st操作台PCR操作箱用常规方法建立cDNA文库或染色体DNA文库来分离基因,需花几个月时间,用PCR方法只要1一2个周;用M13法构建突变体需l一2个月,用PCR法仅用数天;PCR方法扩增的目的DN段可直接用作测序分析,较常用的通过克隆,培养扩增,上海pcr无菌操作台,纯化制备

等步骤获得测序片段更为简便,省时.



PCR实验中常见各种问题的原因解答集合

1 PCR产物的电泳检测时间

     一般为48h以内,有些最,好于当日电泳检测,大于48h后带型不规则甚致消失;

2 假阴性,pcr无菌操作台作用,不出现扩增条带

     PCR反应的关键环节有

     ①模板核酸的制备

     ②引物的质量与特异性

     ③酶的质量及

     ④PCR循环条件,寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究。

     模板:

     ①模板中含有杂蛋白质,

     ②模板中含有Taq酶抑制剂,

     ③模板中蛋白质没有消 化除净,特别是染色体中的组蛋白,

     ④在提取制备模板时丢失过多,pcr无菌操作台,或吸入酚。⑤模 板核酸变性不彻底。在酶和引物质量好时,不出现扩增带,pcr无菌操作台厂商,极有可能是标本的消化处 理,模板核酸提取过程出了毛病,因而要配制有效而稳定的消化处理液,其程序亦应 固定不宜随意更改。


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