PCR实验中常见各种问题的原因解答集合
1 PCR产物的电泳检测时间
一般为48h以内，有些最，好于当日电泳检测，大于48h后带型不规则甚致消失；
2 假阴性，不出现扩增条带
PCR反应的关键环节有
①模板核酸的制备
②引物的质量与特异性
③酶的质量及
④PCR循环条件，寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究。
模板：
①模板中含有杂蛋白质，
②模板中含有Taq酶抑制剂，
③模板中蛋白质没有消 化除净，特别是染色体中的组蛋白，
④在提取制备模板时丢失过多，或吸入酚。⑤模 板核酸变性不彻底。在酶和引物质量好时，不出现扩增带，极有可能是标本的消化处 理，模板核酸提取过程出了毛病，因而要配制有效而稳定的消化处理液，其程序亦应 固定不宜随意更改。
应用TaqDNA聚合酶时，PCR，单核昔酸掺入的速率较高，PCR无菌操作台 ，75℃一80℃时，每个酶分子每秒钟可完成150个核昔合成．PCR每一周期需数分种，所以，一般取用20一30个周期能使目的DNA达到数百万倍扩增的反应只需数小时即可完成．在基因分离，突变体构建，DNA测序等方面，PCR无菌操作台厂家，PCR方法均较之常规方法快速得多．例如，乾芸GENIN PCRroom-1st操作台PCR操作箱用常规方法建立cDNA文库或染色体DNA文库来分离基因，需花几个月时间，用PCR方法只要1一2个周；用M13法构建突变体需l一2个月，用PCR法仅用数天；PCR方法扩增的目的DN段可直接用作测序分析，乾芸PCR无菌操作台 ，较常用的通过克隆，培养扩增，纯化制备
等步骤获得测序片段更为简便，省时．
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